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亚甲基蓝染色步骤，

微生物染色的注意事项：

1、 待检菌菌龄应为18-24小时。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较为稳定，不易受菌龄的长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24小时可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。

2、 涂片以匀薄为佳，切不可浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。镜检革兰氏染色反应时，要以分散开的细菌着色为准。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以不烫手为度，以免菌体受损，致使染色反应不准。

3、 革兰染色操作的关键步骤是对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏阴性菌可染成阳性结果；脱色过度，革兰氏阳性菌会染成阴性结果。故应注意掌握，以无紫色脱出时立即水洗。脱色时间应根据涂沫厚薄、涂片含水量多少适当掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后沥干水分）时，脱色时间稍长；涂沫薄、涂片含水量多（未沥干）时，脱色时间稍短，在20-30秒内调整。

4、 碘液配制后，应装在密闭的暗色瓶内储存。如因储存不当，部分碘将被挥发或被还原，碘液由原来的红棕色变为淡黄色，以至影响固定结晶紫的作用，故不宜再用。

5、 革兰氏染色能否获得满意的结果，与操作者的经验有很大关系。操作没有把握或对染液有怀疑时，应以对照菌同时染色。

微生物培养，是指借助人工配制的培养基和人为创造的培养条件（如培养温度等），使某些（种）微生物快速生长繁殖。微生物培养可分为纯培养和混合培养，前者是指对已纯化的单一菌种进行培养和利用；后者是指对混合菌种或自然样品（如土壤）中的微生物进行培养，然后根据培养基上所生长微生物的种类和数量，可在程度上估算土壤中微生物的多样性与数量。微生物培养需要用到培养基，根据微生物的不同种类和生活习性来配制特定的培养基。微生物培养成功的关键在于无菌操作，如果培养器具和培养基不能灭菌、培养的过程中有杂菌污染是很容易失败的。常用的微生物培养基可分为基础培养基、分离培养基、运送保存增菌培养基、生化试验培养基、药物敏感试验培养基、细菌L型培养基、真菌培养基、培养基、支原体衣原体和螺旋体培养基、病毒培养基等多种培养基。常用的培养基有LB培养基、SOB培养基、PDA培养基、沙保罗琼脂培养基、营养琼脂培养基、SM悬浮培养基、ADF培养基等。

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